Diabetologia：激活但功能损坏的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到胰脏免疫加成到用到1HG高血压病理呕吐的重大突破百余人在儿童中后期就有极佳的描绘，多个胰脏免疫加成阴性的儿童之前有70%在血清转换后10将近患病高血压，而随访15年的儿童这一百分比减低到84%。相比较之下，占病理1HG高血压一半以上的HG1HG高血压的胃癌机制还很难给予充分的统计分析。

更加多的人开始用到分阶段子系统来定义1HG高血压的重大突破：有机躯在用到多种胰脏免疫加成时重回第1前期，用到血糖极度时重回第2前期，用到呕吐时重回第3前期。一些多发胰脏免疫加成阴性的有机躯，在1期和2期，重大突破较更慢，并转型为胃癌的1HG高血压。我们之前描绘了一各别在首次侦测到多种胰脏免疫加成检查和后数10年无高血压的极更慢重大突破者，这各别病人多人少，但不同之处极其明确。随后，我们发现胰脏自身抗原特异性CD8+T肝细胞加成在重大突破较更慢的病人之前基本不存有，但在近期胃癌和长期存有的高血压病人之前很容易侦测到。这可能指出新，与重大突破病人相比较，这些病人免疫加成的调控增强。

早期统计分析指出新，尽管调控性T肝细胞(Treg)数量正常人，但高血压病人存有一些功能缺陷，其之前有数对IL-2的加成能力减低。此外，高血压病人之前的震荡CD4+T肝细胞可能对调控来得具抵抗性，表现为震荡T肝细胞的可抑制消散，自然转化成的Treg和躯外转化成的游离Treg，以及抗原经历的CD4+T肝细胞之前IL-2加成消散。本统计分析的目地是描绘了CD4+调控性T肝细胞(Treg)在在在极较更慢重大突破者之前的不同之处，他们的平均年长为43岁(31-72岁)，随访时长为18-32年。

新方法：BOX统计分析是一项以人群为基础的纵向统计分析，在21岁此表肺癌的病人亲属之前检查1HG高血压的危险原因。我们之前描绘了长期较更慢重大突破者的不同之处，他们保持多重胰脏免疫加成阴性超过10年，但很难用到高血压的病理呕吐，更慢性或非完成性免疫。随后，10名独自保持无高血压并愿意提供大量体内检查和的较更慢重大突破者纳入T和B肝细胞功能统计分析。在现在的统计分析之前，8名更慢重大突破者(SP各别)，之前位年长43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此间的胰脏免疫加成阴性。所有的举例来说都西北面1HG高血压重大突破的1期，尽管一些人随后失去了胰脏免疫加成对某些抗原的阴性加成，然而，一名病人已经西北面2期数6年，但很难用到病理呕吐，一名病人被诊断为高血压，该病患72岁，在收集科学实验检查和时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在统计分析之前对该供躯完成了单独评估。剥离外周血单个核能肝细胞(PBMCs)，采行多模板流式肝细胞练成和T肝细胞可抑制试验评估供躯之前Treg的频带、表HG和功能。用到FlowSOM和CITRUS(聚类深入研究、密切相关和回归)完成无监督聚类统计分析，评估Treg表HG。

结果：与肥胖症供躯相比较，来自更慢重大突破躯的思绪CD4+T肝细胞的监督聚类推断，转录的思绪CD4+ Treg频带减低，与糖皮质激素游离的TNFR相关蛋白(GITR)透露减低有关。一名HbA1c升高的病人与重大突破较更慢者和匹配的对照各别相比较，Treg谱有所相异。功能统计分析指出新，与肥胖症供躯相比较，来自较更慢重大突破躯的Treg介导的CD4+震荡T肝细胞可抑制明显损坏。表现为对震荡CD4+T肝细胞CD25和CD134透露的可抑制减低。

示意图1 深入的表HG统计分析推断，CD4+Treg亚HG在更慢重大突破字段之前减低。由FlowSOM填充的Treg二楼，聚集在来自所有供躯的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据上面物透露深入研究出新10个元簇:思绪T肝细胞_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T肝细胞;HLA-DR + GITR +思绪T肝细胞;文件子系统Treg_1;文件子系统Treg_2;文件子系统Treg_3;和文件子系统Treg_4。(a)用到9个相异Treg上面填充的10个元簇的MST。每个路由表都有一个坦克部队(100个坦克部队)，来得大的元坦克部队(10个元坦克部队)在路由表各别一处绘图。每个路由表之前的饼示意图透露单个上面的透露级别。(b)每个元聚类的热示意图，以推断整躯上面透露。(c, d)为HD各别(c)和SP各别(d)填充示意图，以及FlowSOM标记的每个元簇的很薄。(e-l)比起轻元素为每个metacluster箱内点阵示意图(轻元素> 0.05%)确定为HD和SP各别:文件子系统Treg_2 (e),文件子系统Treg_3 (f),文件子系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T肝细胞(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T肝细胞(l)。粉色白点都有ACSSP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查和。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 用到CITRUS的预测模HG证实，Treg频带的减低是重大突破较更慢的标志。分级相关联(a - f)和柑橘统计分析(g-k)来得SP举例来说和匹配的HD举例来说在CD4+CD45RA−T肝细胞上的相异。(a)流感病毒CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群躯的指标性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3掺入，然后通过HLA-DR和GITR透露完成剥离，模拟FlowSOM群躯。(b) HD(黑斑)和SP(虎纹)各别以及供躯SP 606(粉色)之前CD25+ cd127的频带汇总示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+相关联姪集的箱内点阵示意图;(c) HLA-DRloGITR−(文件子系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件子系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件子系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件子系统T cell)。(g - i)棉花簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3透露强度后处理，标记引人注意的簇被标记为SP和HD字段彼此间的相异。(j)箱内点阵示意图推断了在SP(虎纹)和HD(灰点)各别之前，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的比起轻元素(百分比)。(k)直方示意图推断每个簇的表HG(粉色)和Treg上面比起透露与时代背景透露(粉色);上列，文件子系统Treg_3;请注意正要，文件子系统Treg_4。时代背景与所有其他簇之前上面的透露有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查和

示意图3 与肥胖症献血者相比较，重大突破较更慢者思绪treg的GITR减低。每个思绪CD4+T肝细胞元簇(思绪T肝细胞_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T肝细胞;HLA-DR + GITR +思绪T肝细胞;文件子系统Treg_2;文件子系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个透露上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的透露热示意图(sp606不有数在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇之前所有HD(粉色)、所有SP(粉色)和SP 606(粉色)的FlowSOM GITR透露串联，推断直方示意图(c)和汇总示意图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检查和，p< 0.07(粉色)所有供躯有数，p< 0.05(粉色)供躯SP 606和匹配的HD不有数在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR透露，从分级相关联，从所有HD(粉色)、所有SP(粉色)和SP 606(粉色)串联，推断直方示意图(e)和汇总示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检查和

示意图4 来自较更慢重大突破的CD4+ treg肝细胞控制震荡CD4+T肝细胞的能力减低。SP各别用粉色的线或和白点透露，HD各别用黑色的线或和白点透露，粉色的线或/白点透露供躯sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞完成分选。CD4+CD25−(需要的话者)被上面为CFSE, Treg按捕捉到的百分比起始。用抗CD3 /28微珠再造肝细胞，培植3天后完成流式肝细胞练成侦测。(a-d)与CD4+需要的话者比起应的treg培植(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培植。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE可抑制百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制百分比。用到阴性对照(转录的响应肝细胞不含treg)算出新可抑制百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

示意图5 震荡CD4+T肝细胞对较更慢重大突破的T肝细胞再造的可抑制来得敏感。SP各别用粉色的线或和白点透露，HD各别用黑色的线或和白点透露，粉色的线或/白点透露供躯sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞完成分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel上面，treg按捕捉到的百分比起始。用抗CD3 /28微珠再造肝细胞，培植3天后完成流式肝细胞练成(CD25反染)和肝细胞因姪统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同培植。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE可抑制次之(b)。(c,d) CD25可抑制次之(c)和CD134可抑制次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植之前的透露。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

论点：我们给出新的论点是，来自较更慢重大突破姪的再造思绪CD4+Treg在GITR透露之前给予了扩展和珍贵，合理化了进一步统计分析Treg在1HG高血压几率有机躯之前的一般而言的必要。

标题出新处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28